产品货号:
YT300
中文名称:
超氧化物检测试剂盒
英文名称:
Superoxide Assay Kit
产品规格:
100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本产品是一种用于超氧化物快速高灵敏度检测的试剂盒。本试剂盒利用超氧化物可以还原WST-1产生可溶性有色物质为基础来检测超氧化物。本试剂盒的检测试剂中添加了Catalase(触酶)等,可以清除过氧化氢等过氧化物对WST-1显色的干扰,使测定结果更加准确。并且本试剂盒还提供SOD(超氧化物歧化酶),可以验证本试剂盒测定出的结果是否为超氧化物,以排除检测体系中所用的一些试剂可能产生的干扰。对于本试剂盒,加入SOD后通常可以抑制90%以上的超氧化物。
图1.WST-1法和细胞色素c法对于超氧化物测定效果的比较。
超氧化物通常指超氧化物阴离子(superoxide anion)O2·-,是一种氧分子的自由基。在呼吸链中,NADPH氧化酶把电子传递给氧分子的时候,就会产生超氧化物阴离子O2·-。超氧化物阴离子O2·-是一种强氧化剂,可以由被刺激的白细胞等产生,从而抵御微生物的感染等。超氧化物阴离子O2·-也可以导致氧化损伤,和许多疾病的发生密切相关。
保存:-20℃,有效期一年。
相关搜索:超氧化物检测试剂盒,Superoxide Assay Kit
WST-1是一种类似于MTT的化合物,可以被超氧化物还原生成橙色的formazan。超氧化物产生越多越快,则颜色越深,即相应测定得到的吸光度值越大。
使用WST-1作为检测试剂比用传统的细胞色素c(cytochrome c)检测超氧化物具有多方面的优点。首先,WST-1本身的吸光度非常低(通常OD450为0.02左右,因仪器和酶标板不同而有所不同),而细胞色素c本身的吸光度非常高(通常OD550为0.5左右),因此,使用WST-1与细胞色素c相比,检测灵敏度高很多倍。其次,WST-1的还原产物是稳定的可溶性产物,且对细胞基本无毒性,使WST-1方法更加适合于高通量的筛选。另外,细胞色素c法由于灵敏度的限制,一般不适合用96孔板测定,而WST-1法可以用96孔板测定,使检测更加便捷。用WST-1法或细胞色素c法对超氧化物测定效果比较参考图1。图1中,50万/mL嗜中性粒细胞在37℃用PMA刺激指定时间,用WST-1或细胞色素c方法分别测定。WST-1法测定OD450,而细胞色素c法测定OD550。另外,WST-1法和luminol法相比,灵敏度相近,但仅须使用普通的酶标仪,无须使用luminol法所需的luminometer,并且检测速度也比luminol法更加快捷。
图1.WST-1法和细胞色素c法对于超氧化物测定效果的比较。
超氧化物通常指超氧化物阴离子(superoxide anion)O2·-,是一种氧分子的自由基。在呼吸链中,NADPH氧化酶把电子传递给氧分子的时候,就会产生超氧化物阴离子O2·-。超氧化物阴离子O2·-是一种强氧化剂,可以由被刺激的白细胞等产生,从而抵御微生物的感染等。超氧化物阴离子O2·-也可以导致氧化损伤,和许多疾病的发生密切相关。
组分 | 规格 |
超氧化物检测缓冲液 | 30mL |
WST-1溶液 | 1mL |
Catalase溶液 | 200μL |
SOD溶液 | 20μL |
保存:-20℃,有效期一年。
- WST-1溶液、Catalase溶液和SOD溶液均宜尽量避免反复冻融,可以适当分装。
- 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 超氧化物检测工作液的配制:
按照下表比例配制超氧化物检测工作液:1个检测 5个检测 10个检测 20个检测 50个检测 超氧化物检测缓冲液 200μL 1mL 2mL 4mL 10mL WST-1溶液 10μL 50μL 100μL 200μL 500μL Catalase溶液 2μL 10μL 20μL 40μL 100μL 超氧化物检测工作液 212μL 1.06mL 2.12mL 4.24mL 10.6mL - 悬浮细胞产生超氧化物的检测:
- 细胞用PBS、Hanks液或生理盐水洗涤一次。
- 约按5~10万个细胞/mL的比例,用超氧化物检测工作液悬浮细胞。
- 在96孔板中,每孔加入200μL用超氧化物检测工作液悬浮的细胞,每孔约1~2万个细胞。
- 37℃孵育3分钟。
- 在预定的检测孔中加入预计可以诱导产生超氧化物的刺激物,如PMA等,刺激10~60分钟或其它预定的时间。须至少留一个不加刺激物的孔作为空白对照。选择1~2个加刺激物的孔中加入2μL SOD以验证整个检测体系,加SOD溶液的检测可以不做。试剂盒提供的SOD溶液足够做10个检测。具体检测时的安排参考下表:
细胞 超氧化物检测工作液 刺激物 SOD溶液 空白对照 + + - - 待测样品 + + + - 阴性对照 + + + + - 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片,可以使用420~480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长作为参考波长进行双波长测定。
- 细胞用PBS、Hanks液或生理盐水洗涤一次。
- 贴壁细胞产生超氧化物的检测:
- 约按每孔5000~10000个细胞(具体的细胞接种数量须根据细胞的大小和生长速度自行确定)把细胞培养到96孔板中,使第二天或待检测时细胞为80~90%满。
- 吸去培养液,用PBS、Hanks液或生理盐水洗涤一次。
- 每孔加入200μL超氧化物检测工作液,37℃孵育3分钟。
- 在预定的检测孔中加入预计可以诱导产生超氧化物的刺激物,如PMA等,刺激10~60分钟或其它预定的时间。须至少留一个不加刺激物的孔作为空白对照。选择1~2个加刺激物的孔中加入2μL SOD以验证整个检测体系,加SOD溶液的检测可以不做。试剂盒提供的SOD溶液足够做10个检测。具体检测时的安排参考下表:
细胞 超氧化物检测工作液 刺激物 SOD溶液 空白对照 + + - - 待测样品 + + + - 阴性对照 + + + + - 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片,可以使用420~480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长作为参考波长进行双波长测定。
- 约按每孔5000~10000个细胞(具体的细胞接种数量须根据细胞的大小和生长速度自行确定)把细胞培养到96孔板中,使第二天或待检测时细胞为80~90%满。
相关搜索:超氧化物检测试剂盒,Superoxide Assay Kit