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超氧化物检测试剂盒图片
产品货号:
YT300
中文名称:
超氧化物检测试剂盒
英文名称:
Superoxide Assay Kit
产品规格:
100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本产品是一种用于超氧化物快速高灵敏度检测的试剂盒。本试剂盒利用超氧化物可以还原WST-1产生可溶性有色物质为基础来检测超氧化物。本试剂盒的检测试剂中添加了Catalase(触酶)等,可以清除过氧化氢等过氧化物对WST-1显色的干扰,使测定结果更加准确。并且本试剂盒还提供SOD(超氧化物歧化酶),可以验证本试剂盒测定出的结果是否为超氧化物,以排除检测体系中所用的一些试剂可能产生的干扰。对于本试剂盒,加入SOD后通常可以抑制90%以上的超氧化物。


WST-1是一种类似于MTT的化合物,可以被超氧化物还原生成橙色的formazan。超氧化物产生越多越快,则颜色越深,即相应测定得到的吸光度值越大。


使用WST-1作为检测试剂比用传统的细胞色素c(cytochrome c)检测超氧化物具有多方面的优点。首先,WST-1本身的吸光度非常低(通常OD450为0.02左右,因仪器和酶标板不同而有所不同),而细胞色素c本身的吸光度非常高(通常OD550为0.5左右),因此,使用WST-1与细胞色素c相比,检测灵敏度高很多倍。其次,WST-1的还原产物是稳定的可溶性产物,且对细胞基本无毒性,使WST-1方法更加适合于高通量的筛选。另外,细胞色素c法由于灵敏度的限制,一般不适合用96孔板测定,而WST-1法可以用96孔板测定,使检测更加便捷。用WST-1法或细胞色素c法对超氧化物测定效果比较参考图1。图1中,50万/mL嗜中性粒细胞在37℃用PMA刺激指定时间,用WST-1或细胞色素c方法分别测定。WST-1法测定OD450,而细胞色素c法测定OD550。另外,WST-1法和luminol法相比,灵敏度相近,但仅须使用普通的酶标仪,无须使用luminol法所需的luminometer,并且检测速度也比luminol法更加快捷。


超氧化物检测试剂盒
图1.WST-1法和细胞色素c法对于超氧化物测定效果的比较。


超氧化物通常指超氧化物阴离子(superoxide anion)O2·-,是一种氧分子的自由基。在呼吸链中,NADPH氧化酶把电子传递给氧分子的时候,就会产生超氧化物阴离子O2·-。超氧化物阴离子O2·-是一种强氧化剂,可以由被刺激的白细胞等产生,从而抵御微生物的感染等。超氧化物阴离子O2·-也可以导致氧化损伤,和许多疾病的发生密切相关。


组分规格
超氧化物检测缓冲液30mL
WST-1溶液1mL
Catalase溶液200μL
SOD溶液20μL

保存:-20℃,有效期一年。


  • WST-1溶液、Catalase溶液和SOD溶液均宜尽量避免反复冻融,可以适当分装。
  • 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。



  • 超氧化物检测工作液的配制:
    按照下表比例配制超氧化物检测工作液:
    1个检测5个检测10个检测20个检测50个检测
    超氧化物检测缓冲液200μL1mL2mL4mL10mL
    WST-1溶液10μL50μL100μL200μL500μL
    Catalase溶液2μL10μL20μL40μL100μL
    超氧化物检测工作液212μL1.06mL2.12mL4.24mL10.6mL

  • 悬浮细胞产生超氧化物的检测:
    • 细胞用PBS、Hanks液或生理盐水洗涤一次。
    • 约按5~10万个细胞/mL的比例,用超氧化物检测工作液悬浮细胞。
    • 在96孔板中,每孔加入200μL用超氧化物检测工作液悬浮的细胞,每孔约1~2万个细胞。
    • 37℃孵育3分钟。
    • 在预定的检测孔中加入预计可以诱导产生超氧化物的刺激物,如PMA等,刺激10~60分钟或其它预定的时间。须至少留一个不加刺激物的孔作为空白对照。选择1~2个加刺激物的孔中加入2μL SOD以验证整个检测体系,加SOD溶液的检测可以不做。试剂盒提供的SOD溶液足够做10个检测。具体检测时的安排参考下表:
      细胞超氧化物检测工作液刺激物SOD溶液
      空白对照
      待测样品
      阴性对照

    • 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片,可以使用420~480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长作为参考波长进行双波长测定。
  • 贴壁细胞产生超氧化物的检测:
    • 约按每孔5000~10000个细胞(具体的细胞接种数量须根据细胞的大小和生长速度自行确定)把细胞培养到96孔板中,使第二天或待检测时细胞为80~90%满。
    • 吸去培养液,用PBS、Hanks液或生理盐水洗涤一次。
    • 每孔加入200μL超氧化物检测工作液,37℃孵育3分钟。
    • 在预定的检测孔中加入预计可以诱导产生超氧化物的刺激物,如PMA等,刺激10~60分钟或其它预定的时间。须至少留一个不加刺激物的孔作为空白对照。选择1~2个加刺激物的孔中加入2μL SOD以验证整个检测体系,加SOD溶液的检测可以不做。试剂盒提供的SOD溶液足够做10个检测。具体检测时的安排参考下表:
      细胞超氧化物检测工作液刺激物SOD溶液
      空白对照
      待测样品
      阴性对照

    • 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片,可以使用420~480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长作为参考波长进行双波长测定。

相关搜索:超氧化物检测试剂盒Superoxide Assay Kit
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